簡要描述：Neural Differentiation Medium神經分化培養基NDiff 227（Y40002）是一款成分確定、無血清、包含N2 & B27添加劑的*培養基，用于將單層貼壁生長的小鼠胚胎干細胞向神經方向分化1。該款培養基上市時間超過10年，一共有超過47篇文獻使用。

Neural Differentiation Medium神經分化培養基NDiff 227

Neural Differentiation Medium神經分化培養基NDiff 227（Y40002）是一款成分確定、無血清、包含N2 & B27添加劑的*培養基，用于將單層貼壁生長的小鼠胚胎干細胞向神經方向分化¹。該款培養基上市時間超過10年，一共有超過47篇文獻使用。

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產品特征-Neural Differentiation Medium NDiff 227

成分確定、無血清的*培養基。

經典配方，添加N2,B27。

只作用于小鼠細胞，有效促進小鼠胚胎干細胞向神經方向分化。

添加其他因子后，可以維持人/小鼠干細胞培養。

圖一：分化培養中細胞形態變化

小鼠胚胎干細胞，在使用NDiff 227培養基單層貼壁培養后，分化為神經細胞。

圖二：分化培養產物表達神經細胞標志物Nestin和TUJ1

應用-Neural Differentiation Medium NDiff 227

單層貼壁培養下小鼠胚胎干細胞向神經細胞分化。

單層貼壁條件下的胚胎干細胞維持培養。

文庫篩選化合物。

神經分化的生物特性和功能性的研究與評價。

當添加如Ying QL et al. (2003)文章中的添加劑，Neural Differentiation Medium NDiff 227可以支持小鼠胚胎干細胞無血清、無飼養層培養²。

Neural Differentiation Medium NDiff 227添加生長因子，可以用于成功培養人胚胎干細胞系^{3, 4}。

當添加FGF后，無血清的Neural Differentiation Medium NDiff 227培養基可以將小鼠胚胎干細胞分化為早期的定型內胚層細胞（Anterior Definitive Endoderm，ADE）前體，該前體可以高效分化為肝臟細胞和胰腺細胞⁵。

保存-Neural Differentiation Medium NDiff 227

-20℃保存，保質期一年。融化后，4℃避光保存，4周內使用。

使用方法-Neural Differentiation Medium NDiff 227

使用前準備：培養基避光水浴解凍，*解凍前轉移培養基防止被加熱，再接著柔力混合解凍全部培養基。也可以避光4℃解凍。如果出現沉淀，4℃過夜放置使沉淀*溶解。培養基有可見沉淀時不能使用，要確保使用前已經*溶解。

單層貼壁培養下的小鼠胚胎干細胞神經分化：

1.在明膠包被的塑料培養器皿中，添加NDiff 227培養基，接種早期傳代的胚胎干細胞，接種密度：2.5 - 10 x 10³ cells/cm²。

2.每一兩天更換培養基。神經分化早期預計會出現胚胎干細胞死亡造成的污染。

3.通過細胞形態和神經元標記物染色監控神經元分化。培養4-6天后，神經分化表現明顯，7-9天后神經元成熟。

歡迎您致電咨詢Neural Differentiation Medium NDiff 227 華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司  ：152 1681 4001。華雅再生醫學-客服: 316 808 6348

背景知識

從胚胎干細胞或神經干細胞直接分化成神經細胞需要進行培養基優化保證結果的可靠性。

Neural Differentiation Medium NDiff 227，神經細胞分化的有效誘導培養基，通過使用傳統配方再添加N2和B-27，可以進行簡單高效的神經分化。

1. 為什么研究“體外干細胞向神經細胞分化"？

· 有一類病叫做神經退行型疾病，常見的包括阿爾茨海默病、帕金森病。神經退行性疾病的一個很顯著的現象就是腦細胞的消亡減少和腦細胞正常功能的喪失。

· 干細胞治療的概念在治療神經退行性疾病的研究中有著很大的吸引力。生物醫學研究者的大概設想是，在體外（如細胞培養皿、細胞培養瓶）把干細胞定向誘導分化成為神經細胞，獲得這些從干細胞分化來的神經細胞后，把他們重新注射回到病人的腦部。這些注射回去的干細胞替代那些病人原來的不正常的干細胞，從而使得病人的癥狀得到緩解。

· 體外能夠把干細胞誘導分化出神經細胞是干細胞治療zui為基礎的步驟。在2003年前的這方面的研究中，有兩個條件被認為二者必據其一（只考慮貼壁培養干細胞的方式）：*，認為干細胞生長后形成好多細胞聚集在一起的（多層細胞）集落，是干細胞向神經細胞方向分化的必要條件；第二，認為與其他飼養層細胞共同培養是必須的（哺乳動物細胞貼壁培養時，使用飼養層細胞來支持或滋養干細胞生長）。但是按照這樣的條件，在培養中會造成一個很大的問題，即無法做到標準化地誘導干細胞分化為神經細胞。簡單地說，就是似乎是*同樣的實驗條件，但是分化誘導的結果大不相同。這樣，是無法將獲得的神經細胞用于后續的回輸實驗的，因為兩次實驗回輸的細胞在生理狀態上有明顯的差別。

· 因此，發現一個標準化的、少用外源因子（飼養層細胞是使用很多的外源因子）的方法，是“體外干細胞向神經細胞分化"工作者必須解決的難題。

2. RHB-A和Neural Differentiation Medium NDiff 227培養基介紹

· 在2003年前，研究者發現在貼壁培養胚胎干細胞時，需要加入兩種因子去誘導干細胞分化成為神經細胞，即N2和B27，其中Cellartis有N2添加劑。這兩種因子現在已經成為神經分化實驗中*的角色。

· 在2003年，蘇格蘭干細胞研究所的研究人員在Nature雜志上發表了一篇重要的研究報道，他們證明：

1）貼壁培養胚胎干細胞時，加入N2和B27后，超過半數的干細胞分化成為了神經前體細胞；

2）這個實驗中，干細胞不形成聚落，單層生長。這個實驗中外源因子很少，高度可控。因此，這個實驗成為了體外誘導分化干細胞成為神經細胞的標準實驗方案。這個培養基，就是Cellartis的Neural Differentiation Medium NDiff 227培養基。（conversion of embryonic stem cells into neuroectodermal precursors in adherent monoculture）。

· 2008年，Cellartis在Ndiff227培養基的基礎上做了改進，研發出RHB-A培養基。葡萄牙的研究團隊比較了Ndiff227和RHB-A兩種培養基，發現貼壁培養干細胞誘導分化神經細胞的實驗中，使用RHB-A培養基，形成神經細胞的數量比使用Ndiff227的情況多出10%以上。

· RHB-A和Ndiff227廣泛應用于美國與歐州國家的科研實驗中，有多篇文獻可作為參考。

Neural Differentiation Medium NDiff 227僅供科研使用。

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