本篇教你間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基該如何制備

　　間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是一類具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞，可用于許多治療領(lǐng)域。為了研究和應(yīng)用這些細(xì)胞，需要制備一種適合它們生長(zhǎng)和增殖的培養(yǎng)基。以下是制備間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的步驟。
 

　　1.培養(yǎng)基配方的確定
 

　　間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的組成包括基礎(chǔ)培養(yǎng)液和補(bǔ)充物兩部分。基礎(chǔ)培養(yǎng)液可以選擇DMEM/F12、MEM或α-MEM等，其中含有必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和緩沖劑，可以維持MSCs的基本生長(zhǎng)需求。補(bǔ)充物可根據(jù)不同研究目的進(jìn)行調(diào)整，常見(jiàn)的有10%胎牛血清(FBS)、5-20 ng/ml的人重組FGF、L-抗壞血酸酸鈉(Vc)、牛血清白蛋白(BSA)等。在補(bǔ)充物選擇上，注意避開(kāi)對(duì)細(xì)胞有毒的成分。
 

　　2.消毒操作
 

　　將所有耗材(瓶蓋、吸頭、移液管等)在121℃高壓蒸汽下滅菌30min以上，同時(shí)將操作臺(tái)面、手套、藥品瓶口用70%乙醇擦拭，避免細(xì)菌污染。
 

　　3.基礎(chǔ)培養(yǎng)液的配制
 

　　按照培養(yǎng)基配方的要求稱量并加入適量的無(wú)菌純水，混合均勻后用0.22um濾器過(guò)濾滅菌。
 

　　4.補(bǔ)充物的添加
 

　　將經(jīng)過(guò)消毒和質(zhì)檢的補(bǔ)充物根據(jù)所需比例加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)液中，同時(shí)通過(guò)濾器再次過(guò)濾消毒。
 

　　5.調(diào)節(jié)pH值
 

　　用NaOH或HCl等調(diào)節(jié)劑將培養(yǎng)基的pH值調(diào)至7.2-7.4，以確保MSCs在正常生理范圍內(nèi)生長(zhǎng)。
 

　　6.分裝與保存
 

　　將制作好的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基分裝到無(wú)菌試管或瓶中，密封好后存放于-20℃冰箱中保存。使用前需要先解凍并加入適當(dāng)?shù)目股胤乐辜?xì)菌污染。
 

　　總之，制備間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基需要嚴(yán)格遵守消毒操作和培養(yǎng)基配方的要求，以確保培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定和可靠性。