心肌分化試劑盒的復蘇和維持

 　　之前的文章中介紹過心肌分化試劑盒的凍存方法，本文再給大家說說心肌分化試劑盒的復蘇和維持。

　　心肌分化試劑盒的復蘇方法：

　　1. 37℃水浴預熱心肌接種培養基，取出包被過Matrix的培養皿/瓶，吸去包被液并加入適量心肌接種培養基，置于5% CO2的37℃恒溫細胞培養箱中。

　　2. 37℃解凍細胞，快速搖晃使細胞融化至僅剩一小塊冰晶(避免凍存管蓋接觸水面)，迅速取出并用70%酒精消毒凍存管外表面。

　　3. 用1ml移液器小心的將細胞懸液轉移至一個新的50ml離心管，避免劇烈吹吸。

　　4. 用1ml 心肌接種培養基潤洗凍存管，以收集剩余細胞。然后逐滴加入含有細胞懸液的50ml離心管，由于zui初滴加的稀釋比例較大，應維持在5秒1滴(50uL)的較慢速率，2分鐘左右滴加完此1ml培養基，滴加過程中不斷輕搖混勻。

　　5. 以每秒1滴的速率，逐滴加入4ml 心肌接種培養基，滴加過程中不斷輕搖混勻。200g離心5分鐘。

　　6. 用心肌接種培養基重懸細胞，輕柔吹打混勻，并接種到準備好的培養皿/瓶中，水平十字振動使細胞均勻分布。

　　7. 5% CO2的37℃恒溫培養箱中培養48小時，更換為心肌維持培養基，維持培養。

　　心肌分化試劑盒的維持：

　　1. 37℃水浴預熱心肌維持培養基。

　　2. 獲得的心肌細胞用心肌維持培養基培養，每48小時換液一次;或者加入標準量150%的維持培養基，每72小時換液一次。

　　3. 細胞在4周內性狀穩定。如果需要長期培養，為了維持細胞穩定性和純度，需要定期采用心肌純化*培養基進行處理，一般每4-6周處理一次，每次持續3-4天。