淋巴細胞分離液

分離目的  
方便在人體外對機體各種免疫細胞分別作鑒定，計數(shù)或功能測定。  淋巴細胞分離以后可以做淋巴細胞抗原片制備，E花環(huán)試驗，淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗，淋巴細胞培養(yǎng)（需無菌操作）    【分離原理】    人 淋巴細胞的方便來源是外周血，分離的原則是收率較高，純度較好，失活較低，根據(jù)不同試驗有相對純度，無論采用哪種方法，應(yīng)盡zui大可能保持細胞應(yīng)有活性。分 離的技術(shù)可根據(jù)細胞的物理性狀和表面標(biāo)志設(shè)計，根據(jù)不同實驗?zāi)康目刹捎妹芏忍荻入x心法、吸附分離法和其它特殊分離法。此次實驗采用的1就是密度梯度離心法。其原理是：人外周血中各種細胞的密度不同，人紅細胞密度為1.093，粒細胞為1.092，淋巴細胞為1.074±0.001。密度梯度離心法的原理主要根據(jù)各類血細胞比重的差異，利用比重介于某兩類細胞之間的細胞分離液對血液離心，使一定比重的血細胞依相應(yīng)的密度梯度分布于不同的獨立帶，從而達到分離的目的。      
材料
1、肝素抗凝管，普通管（負壓），采血針，血清收集管 2、淋巴細胞分離液(比重1.077 – 1.080 g/mL）。 3、無Ca++、Mg++、Hank's 液  4、刻度吸管、毛細吸管、離心管、離心機等。  5置于冰箱的冷丙酮（固定細胞，保持細胞的完整性）   
方法
1．采靜脈血2ml加入肝素抗凝管（或枸櫞酸鈉），3ml加入普通管。  2．普通管斜面放置30MIN，此時可分離淋巴細胞。用竹簽將血塊輕輕剝離管壁（主張用玻璃棒），2000rPm離心20分鐘，用毛細吸管吸取上清（血清）于血清收集管中，于4℃冰箱保存?zhèn)溆?，用于以后的ELISA實驗，對流免疫電泳實驗和傷寒試管凝集實驗，溶血反應(yīng)，免疫比濁測定補體C3或C4等等。（剝離時也可用毛細吸管輕輕剝離）