內皮細胞培養基的配方通常包括基礎培養基和特定的補充成分。以下是一個常用的內皮細胞培養基配方示例:
基礎培養基
Dulbecco'sModifiedEagleMedium(DMEM)或RPMI1640
選擇合適的基礎培養基,DMEM比較常用。
補充成分
胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)
最終濃度:10%(v/v)
青霉素-鏈霉素溶液(Penicillin-Streptomycin)
最終濃度:100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素。
內皮生長因子(EndothelialGrowthFactor,EGF)
最終濃度:10-20ng/mL。
血管內皮生長因子(VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF)
最終濃度:10-50ng/mL。
轉化生長因子β(TransformingGrowthFactor-beta,TGF-β)
最終濃度:1-10ng/mL(可選)。
其他添加劑(可根據需要選擇):
生長因子(如FGF,基本成纖維生長因子)、胰島素、氨基酸等。
配制步驟
準備基礎培養基:根據需要取適量的DMEM或RPMI1640。
添加胎牛血清:加入FBS,輕輕混合均勻。
添加抗生素:加入青霉素-鏈霉素溶液,混合均勻。
添加生長因子:按照上述濃度分別添加EGF、VEGF、TGF-β等生長因子。
調節pH:確保培養基的pH在7.2-7.4之間,可以使用鹽酸或氫氧化鈉進行調節。
過濾滅菌:使用0.22μm過濾器進行滅菌,以去除微生物。
存儲條件
配制好的培養基應存放在4°C冰箱中,避免反復凍融,建議使用時分裝。
請根據實驗需要調整成分及其濃度,并遵循相關的操作規程和安全指南。