不同來源人間充質干細胞的原代培養及傳代 臍帶 脂肪

人間充質干細胞的不同來源

人類骨髓來源間充質干細胞

新生兒臍帶來源間充質干細胞

新生兒臍帶血來源間充質干細胞

人類臍帶華通氏膠來源間充質干細胞

人類脂肪來源間充質干細胞

人類羊水來源間充質干細胞

人類牙髓來源間充質干細胞

人類皮膚來源間充質干細胞

新生兒胎盤來源間充質干細胞

人類唾液腺來源間充質干細胞

人類滑膜來源間充質干細胞

1 人類骨髓來源間充質干細胞

密度梯度離心骨髓，貼壁法原代培養間充質干細胞。

人類骨髓來源間充質干細胞分離

Ficoll密度梯度離心

人類骨髓來源間充質干細胞原代及傳代培養

Knock out DMEM，DMEM+10%FBS

2 新生兒臍帶來源間充質干細胞 新生兒臍帶血來源間充質干細胞

組織塊培養法、密度梯度離心法等處理臍帶、臍帶血，貼壁法原代培養間充質干細胞。

新生兒臍帶來源間充質干細胞 新生兒臍帶血來源間充質干細胞分離

Ficoll-Hypaque 密度梯度離心，酶消化法（0.25% 胰蛋白酶-EDTA），組織塊培養法

新生兒臍帶來源間充質干細胞 新生兒臍帶血來源間充質干細胞原代及傳代培養

DMEM+10%FBS，10%FCS，MSCGM+10%FCS

3人類臍帶華通氏膠來源間充質干細胞

組織塊培養法、酶消化法處理華通氏膠，貼壁法原代培養間充質干細胞。

人類臍帶華通氏膠來源間充質干細胞分離

組織塊培養法, 酶消化法 (0.1% 膠原酶II,1 mg/ml 膠原酶B+胰蛋白酶, 膠原酶 +hyaluronidase +胰蛋白酶,胰蛋白酶-EDTA, 0.26% 膠原酶I+ 0.07% hyaluronidase+0.125% 胰蛋白酶)

人類臍帶華通氏膠來源間充質干細胞原代及傳代培養

DMEM/DMEM-F12 + 10% FBS

4 人類脂肪來源間充質干細胞

酶消化法處理脂肪組織，貼壁法原代培養間充質干細胞。

人類脂肪來源間充質干細胞分離

酶消化法(1.5 mg/ml 膠原酶 I, 1 mg/ml 膠原酶-I in 0.1% BSA)

人類脂肪來源間充質干細胞原代及傳代培養

DMEM-Low Glucose+MCDB201+ 2% FCS,DMEM+ 20% FBS,MesenproRS

5 人類羊水來源間充質干細胞

密度梯度離心、酶消化法處理羊水，貼壁法原代培養間充質干細胞。

人類羊水來源間充質干細胞分離

密度梯度離心,酶消化法 (0.25% 胰蛋白酶 +1.2 units/ml of dispase + 2 mg/ml 膠原酶I）

人類羊水來源間充質干細胞原代及傳代培養

a-MEM + 20% FBS, DMEMF12 + 10% FBS, high glucose DMEM + 20% hESC-defined FBS, KSR-based 培養基

6 人類牙髓來源間充質干細胞

酶消化法處理牙髓，貼壁法原代培養間充質干細胞。

人類牙髓來源間充質干細胞分離

酶法 (387.1 U/+mg 膠原酶+ 0.70 U/mg dispase II)

人類牙髓來源間充質干細胞原代及傳代培養

D-MEM-F12, a-MEM + 2% FCS

7 人類皮膚來源間充質干細胞

酶消化法處理皮膚組織，貼壁法原代培養間充質干細胞。

人類皮膚來源間充質干細胞分離

酶消化法 (0.6 U/ml dispase, 0.62 Wunsch U/ml Liberase Blendzyme 1,1.25 mg/ml 膠原酶 I)

人類皮膚來源間充質干細胞原代及傳代培養

DMEM-F12 1 10/5/0.5% FBS, DMEM + 20% FBS

8 新生兒胎盤來源間充質干細胞

Ficoll 密度梯度離心、酶消化法處理胎盤，貼壁法原代培養間充質干細胞。

新生兒胎盤來源間充質干細胞分離

Ficoll 密度梯度離心, 酶消化法(1 mg/ml Dispase, 300 U/ml 膠原酶, 100 U/ml Hyalluronidase,

80 U/ml DNAse I, 0.25% 胰蛋白酶-EDTA)

新生兒胎盤來源間充質干細胞原代及傳代培養

DMEM 低糖 + 20% FBS

9 人類唾液腺來源間充質干細胞

酶消化法處理唾液腺，貼壁法原代培養間充質干細胞。

人類唾液腺來源間充質干細胞分離

酶消化 (1.67 mg/ml 膠原酶+ 1.33 mg/ml hyaluronidase, 1.67 mg/ml dispase; 5.01 mg/ml 膠原酶2 + 3.99 mg/ml hyaluronidase,33.4 mg/ml dispase)

人類唾液腺來源間充質干細胞原代及傳代培養

DMEM + 10% FCS, DMEMF12 + 3% FBS

10 人類滑膜來源間充質干細胞

Ficoll–Paque 密度梯度離心、酶消化法處理滑膜，貼壁法原代培養間充質干細胞。

人類滑膜來源間充質干細胞分離

Ficoll–Paque 密度梯度離心, 酶消化法 (3mg/ml 膠原酶V)

人類滑膜來源間充質干細胞原代及傳代培養

a-MEM + 10% FBS, 20% FBS

名詞解釋

Ficoll密度梯度離心 常用來分離人外周血單個核細胞（PBMC）的分層液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，平均分子量為400,000，當密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞，就可從外周血中分離到單個核細胞。Ficoll-Paque 分離液適用血液、骨髓和臍帶血來源的人單個核細胞分離（包括間充質干細胞）。

DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium是一種廣泛使用的基礎培養基，可用于支持很多種類的哺乳動物細胞生長。

組織塊培養法 組織切成小塊，接種培養器皿培養細胞。

酶消化法 用胰蛋白酶和膠原酶等消化組織塊，分離細胞進行培養。

膠原酶 是一種蛋白酶，它能夠特異性的結合 Pro-X-Glyc-Pro序列中，中性氨基酸（X）和甘氨酸之間的肽鍵。該序列高頻率的存在于膠原中。膠原酶是*的一種可以降解廣泛存在于結締組織中的具有三股螺旋的天然膠原纖維的蛋白酶。

Hyaluronidase 透明質酸酶

Dispase 分散酶

DNAse 脫氧核糖核酸酶

附：人間充質干細胞的培養

人間充質干細胞的下游應用是組織修復等疾病治療，因此它的培養要滿足醫用的高標準。隨著臨床應用的成熟，間充質干細胞培養基也經歷了從有血清到無血清培養基的轉變。

有血清培養基一開始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產品，批次間差異大，影響實驗穩定性，尤其還是異源物，會有病原體污染風險和免疫影響，不利治療安全，需要額外監管。于是越來越多的血清培養基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。

低血清或人源血清仍然不夠穩定，也不能*免除病原體的污染風險，隨之興起的是成分確定的無血清培養基。無血清培養基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來消滅異種蛋白輸入人體可能會引起的免疫抗體反應。比如血清中zui基礎的白蛋白、轉鐵蛋白和胰島素，無血清培養基都改用重組人轉鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產物。無血清培養基發展中，確定了多種生長因子是人間充質干細胞擴增必須添加的。

相關產品

Ficoll 密度梯度分離液 Ficoll-Paque PREMIUM改良于Ficoll-Paque PLUS，后者作為一種從骨髓、外周血和臍帶血中高得率分離單個核細胞的無菌密度梯度介質已應用了三十多年。與Ficoll-Paque PLUS不同的是，Ficoll-Paque PREMIUM的生產是在嚴格控制環境下完成的, 生產條件符合ISO 13485:2003標準，GMP認證和美國藥典的建議，可用于生產細胞治療相關產品。細胞毒性等級為0。有RSF文件。

膠原酶 I 型膠原酶從溶組織梭菌制備，用于細胞和組織的解離。

人間充質干細胞無血清培養基 與以DMEM為基礎的血清培養基相比優勢在于，成分確定，無動物源成分，適合臨床研究。HY StemCell CCGmHum^TM 人間充質干細胞無血清培養基是成分確定、無血清、無動物源，無需鋪板膠的*培養基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質干細胞的原代培養。培養的hMSC可傳多代。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質干細胞無血清培養基包括【Basal Medium 基礎培養基】 和 【Supplement Medium 細胞因子添加物】兩部分。基礎培養基中添加Hepes和L-谷氨酰胺。細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

產品信息

密度梯度分離液 膠原酶

人間充質干細胞無血清培養基

人間充質干細胞的鑒定參見人間充質干細胞流式檢測方案

參考文獻

1 Dolly Mushahary, et al. Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017

2 人類間充質干細胞庫建設與管理規范，SZDB/Z 126-2015

更多間充質干細胞培養產品華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司，紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，主營干細胞、醫療、細胞治療、器官再生四大板塊的產品。