PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒技術原理

介紹

胚胎植入前遺傳學篩查（PGS）可利用微陣列方法或NGS來開展，目前IVF機構zui常用的是微陣列比較基因組雜交（array CGH）。

植入前基因篩查和診斷（PGS，PGD）是指體外受精（IVF）過程中所做的胚胎或卵母細胞測試，以便選擇沒有染色體變異和家族遺傳病等位基因的胚胎，提高懷孕成功率，減少特定遺傳病的傳遞風險。微陣列分析是IVF機構zui常用的PGS技術，這類試劑盒有好幾種都嵌合了PicoPLEX技術，被廣泛使用。包括Illumina’s 24Sure 微陣列, Perkin Elmer’s KaryoLite BoBs developed for PGS和 Oxford Gene Technology’s CytoSure™ 微陣列。不過實驗室研究的趨向是使用低覆蓋度（low pass）的新一代測序（NGS）替代微陣列，PicoPLEX DNA-seq正好滿足這種需求。

應用PicoPLEX的PGS技術：吸取單個胚胎細胞——細胞裂解，DNA擴增（Rubicon PicoPLEX WGA Kit單細胞全基因組擴增試劑盒）——微陣列基因組雜交——染色體拷貝數變異分析

詳細：

首先從受精卵吸取一個極體或者從受精后第三天的5到10個胚胎細胞吸取單細胞。裂解細胞后，釋放出來的DNA進行擴增，所得產物標記后與含有目標基因組的微陣列雜交。分析軟件會識別出拷貝數變異。PicoPLEX全基因組擴增技術具有高穩定性和可再現性，已經成為PGS的標準擴增技術。這一技術也適用任何單細胞樣品和皮克級純化DNA的基因特征分析。

PicoPLEX單細胞全基因組擴增技術

包括文庫構建和文庫擴增兩個步驟。文庫構建（預擴增）階段，設計的特殊引物能消除引物之間的雜交，從而提高引物和模板的配對效率。利用特殊隨機引物（Quasi-random primer）引發線性擴增進行全基因組擴增。特別設計的隨機引物（參見US patent 8,206,913）能減少引物二聚體的形成，從而提高引物和模板的配對效率。

PicoPLEX相比于以往的PCR、MDA、MALBC為基礎的單細胞全基因組擴增技術，操作簡單快速。

PicoPLEX單細胞全基因組擴增技術

分兩次擴增。*次擴增，特殊隨機引物與基因組DNA結合，形成莖環形結構文庫，第二次擴增，只有莖環形結構的文庫被擴增。

RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒技術原理及應用由華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再整理。

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RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒

PicoPLEX WGA Kit采用技術，設計優化用于從單細胞中擴增全基因組DNA。起始樣本量低至單細胞或6pg基因組DNA。便捷的單管操作流程降低污染節省時間。結果穩定性、重復性好。

PicoPLEX WGA Kit適用array CGH分析和PCR平臺。PicoPLEX技術被IVF供應商如BlueGnome信賴并用于PGS，BlueGnome CGH也是中國福利會和平婦幼保健院所用的PGS平臺。

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