Corning康寧澳洲胎牛血清使用中常會碰到的問題是什么

 　　我們在應用Corning康寧澳洲胎牛血清的過程中，常會遇到一些問題，該如何應對呢。我們根據經驗整理如下：

　　1、如何儲存和解凍Corning康寧澳洲胎牛血清才不會使產品質量受損?

　　將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。

　　長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。

　　建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內(由于血清結凍時體積會增加約10 %， 必須預留此膨脹體積之空間，否則易發生污染或容器凍裂之情形)，再放回冷凍。

　　2、Corning康寧澳洲胎牛血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

　　沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產品性質。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

　　3、如何避免Corning康寧澳洲胎牛血清中產生沉淀?

　　按如下操作可避免沉淀的產生：

　　(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

　　(2)血清分裝凍存時，須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

　　(3)勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

　　(4)勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

　　(5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

　　(6)若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

　　4、胞培養中出現黑點是污染嗎?如何處理?

　　一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

　　如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么黑點的出現可能與以下幾種情況有關：

　　(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;

　　(2)配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;

　　(3)血清質量不好，反復凍融的結果;

　　(4)配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長;

　　(5)培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。