流式抗體如何搭配流式熒光素

 　　之前的文章中，我們介紹了流式抗體的選購(gòu)參考因素，本文我們將繼續(xù)為大家講解流式抗體是如何搭配流式熒光素的，原則是什么呢?

　　流式抗體搭配流式熒光素主要有2個(gè)原則：

　　*，每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。

　　第二，各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配，因此需要注意：

　　1、流式抗體每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。以Calibur為例說明，Calibur的FL1通道選擇了Alexa Fluro488就不能選FITC ，或者選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488。Calibur的FL3通道盡管能檢測(cè)PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五個(gè)熒光素，但是我們搭配的時(shí)候只能選擇其中1個(gè)。

　　2、各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配：如果客戶的流式細(xì)胞儀能做4個(gè)通道，在第1個(gè)原則之下，那么每個(gè)通道隨便選出1個(gè)熒光素就可以組合成4個(gè)顏色。以2跟激光的Calibur為例，Calibur各個(gè)熒光素之間可以搭配出16種組合。比如常用的搭配是F I T C( F L 1 )+P E(F L 2)+PerCP(FL3)+APC(FL4)，這個(gè)搭配組合可以更改成Alex Fluro(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4), 或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+Alex Fluro(FL4)，或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PE-Cy5(FL3)+APC(FL4)等等。總之，在第1原則之下，我們可以隨意搭配和組合各個(gè)熒光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的話，上流式以后，容易導(dǎo)致補(bǔ)償過度。

　　流式抗體使用注意事項(xiàng)：

　　(1)建議實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的數(shù)量和抗體的比例要適當(dāng)。細(xì)胞過量或抗體過量都可能使實(shí)驗(yàn)結(jié)果受影響，因此需要優(yōu)化試驗(yàn)條件。注：不同的流式技術(shù)對(duì)抗體的需求量有較大差異，例如傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)(采用鞘液流系統(tǒng))需要1×106個(gè)細(xì)胞為起始上樣量，抗體用量為10μl，而微流式細(xì)胞術(shù)則只需5×105個(gè)細(xì)胞，抗體用量減少到5μl。

　　(2)直標(biāo)的流式抗體應(yīng)該4℃避光保存，不要冷凍。盡量選擇經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的流式抗體，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。