支原體,又稱(chēng)霉形體,沒(méi)有細(xì)胞壁的原核生物,為目前發(fā)現(xiàn)的zui小的zui簡(jiǎn)單的原核生物。支原體細(xì)胞中*可見(jiàn)的細(xì)胞器是核糖體。它對(duì)許多抗生素具有抗性,如類(lèi)胸膜肺炎微生物。
支原體檢測(cè)試劑盒是利用支原體酶的這一特定活性,進(jìn)行選擇性的生物化學(xué)檢測(cè)。這些酶的存在提供了一種快速的篩選操作,能靈敏地檢測(cè)出樣本中的支原體污染。
支原體檢測(cè)試劑盒的原理
這些存活的支原體被溶解,然后釋放出來(lái)的酶與支原體檢測(cè)試劑盒中提供的底物發(fā)生催化反應(yīng),將ADP轉(zhuǎn)化成ATP。通過(guò)測(cè)量樣品中添加底物前后ATP的含量,可以得到一個(gè)比率,該比率指示支原體是否存在。如果這些酶不存在,第二次讀數(shù)相對(duì)于*次讀數(shù)就沒(méi)有增加;如果酶與底物進(jìn)行特異性反應(yīng),就會(huì)導(dǎo)致ATP含量上升。ATP含量的上升通過(guò)生物發(fā)光化學(xué)反應(yīng)可以檢測(cè)到,其公式如下:
Luciferase
ATP + Luciferin + O2 ——————> Oxyluciferin + AMP
Mg 2+ + PPi + CO2 + LIGHT
這個(gè)反應(yīng)的發(fā)生是在室溫(18°C~22°C)進(jìn)行的,也是熒光素酶反應(yīng)的*溫度。在支原體檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理中,zui后通過(guò)分光光度計(jì)讀數(shù),由于發(fā)出光的強(qiáng)度與ATP的濃度成線性關(guān)系,因此可檢測(cè)支原體的污染問(wèn)題。
支原體檢測(cè)試劑盒的特征
支原體檢測(cè)試劑盒是專(zhuān)門(mén)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中是否被支原體污染的經(jīng)典試劑盒,它包含檢測(cè)所用到的各種試劑和產(chǎn)品操作手冊(cè)。支原體檢測(cè)試劑盒具有操作簡(jiǎn)單、快速、結(jié)果穩(wěn)定可靠、靈敏度*等優(yōu)點(diǎn),讓您在支原體檢測(cè)時(shí)輕松容易,并確保您的培養(yǎng)潔凈無(wú)污染。該支原體檢測(cè)試劑盒的主要特征如下:
快速。20分鐘內(nèi)即可診斷出你的細(xì)胞培養(yǎng)是否健康無(wú)污染,而其它方法一般要幾個(gè)小時(shí)到一周的時(shí)間。
適用性好。可以檢測(cè)所有支原體和無(wú)膽甾原體在常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染。
靈敏度高。可檢測(cè)<50 cfu/ml的支原體,避免出現(xiàn)像PCR和熒光染色方法出現(xiàn)的陰性結(jié)果。
方便。只需把你的細(xì)胞培養(yǎng)物與兩種試劑混合配成100ul,在分光光度計(jì)上讀2次數(shù)。
完整。該支原體檢測(cè)試劑盒包含實(shí)驗(yàn)所需的所有試劑,而不像商業(yè)PCR檢測(cè)方法中需要你提供PCR酶、核酸、限制性內(nèi)切酶和瓊脂糖電泳所需的其它試劑。
采用發(fā)光檢測(cè),更能快速反映細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染。避免支原體造成的損害,省力。